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一、原理1.超氧化物歧化酶(SOD)超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)是一種能專一地清除超氧離子自由基()的金屬酶,它具有抗衰老、抗輻射、抗炎及抗癌等作用因而在醫(yī)藥、化妝品及食品工業(yè)等方面有了廣泛的應(yīng)用前景。

   SOD是一種酸性蛋白,對熱、pH和蛋白酶的水解較一般酶穩(wěn)定。按照它所含金屬離子的不同,可分為Cu-Zn-SOD(二聚體,藍綠色)、Mn-SOD(紫紅色)和Fe-SOD(黃褐色)三種。SOD催化下述反應(yīng):2+2→+。機體內(nèi)的過量和不足均對機體不利,SOD對過量的的及時清除保證了機體內(nèi)的含量相對的平衡。機體內(nèi)的形成可分為生理性和病理性兩方面。

在一些正常生理過程中會形成一些。例如:呼吸鏈中電子傳遞結(jié)果可產(chǎn)生一些。在某些疾病(如氬中毒、輻射病等)過程中會產(chǎn)生大量的。過量的如不及時清除,會對細胞損傷。SOD將歧化為和,而過氧化氫(物)酶、谷胱甘肽過氧化酶可催化或氧化氫分解,在機體內(nèi)形成一套解毒系統(tǒng),對機體起防護作用。

   原理2.有機溶劑沉淀法分離純化蛋白質(zhì)本實驗采用有機溶劑沉淀法以新鮮豬血為原料,從中提取SOD并進行分離純化。

二、操作步驟

1.SOD的提取

[1]取新鮮豬血200ml于500ml離心管,6000r/min,10min離心,去上層血漿,取下層紅血球粘稠液,然后加入2倍體積的0.9%NaCl溶液清洗,6000r/min,10min離心,棄上層清液,再加入2倍體積的0.9%NaCl溶液重復(fù)清洗一次,6000r/min,10min離心,得洗凈的紅血球粘稠液。

[2]向洗凈的紅血球中加入等體積的蒸餾水,劇烈攪拌30min,使其充分溶血。再向溶血液中緩慢加入預(yù)冷的0.25倍體積的95%乙醇溶液和0.15倍體積的氯仿,勻漿呈暗紅色,再繼續(xù)攪拌15min,4000r/min,10min離心,去變性蛋白沉淀物,得上層液,留樣500ul(樣1)。然后將清液在65-70℃恒溫水浴中進行熱處理,15min后取出迅速冷卻到室溫,4000r/min,5min離心除去沉淀,得淺黃色粗酶液,留樣500ul。

[3]向粗酶液中加入等體積的丙酮溶液,冰箱靜置過夜,6000r/min,10min棄上清液,得沉淀。將沉淀物用等體積預(yù)冷的丙酮溶液清洗兩次,離心收集沉淀,自然干燥即得淡綠色成品,溶于30ml蒸餾水,備用。

      本次來自上海某制藥廠的負責(zé)人在完成提取超氧化物歧化酶的實驗后，對實驗所獲取的成果表示非常滿意，更對我們上海盧湘儀生產(chǎn)的DL-8M大容量冷凍離心機以及服務(wù)表示贊賞，愿意與上海盧湘儀離心機儀器有限公司保持長期合作關(guān)系。上海盧湘儀總經(jīng)理李桂梅表示愿意為國內(nèi)制藥行業(yè)的發(fā)展盡一份綿薄之力，更感謝上海某制藥廠對盧湘儀離心機產(chǎn)品的信任與支持，我們將會持之以恒地為貴廠提供最優(yōu)質(zhì)的離心機產(chǎn)品與服務(wù)。